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染色凋亡試劑盒的實(shí)驗(yàn)方法和原理

更新時(shí)間:2021-08-03瀏覽:700次

  染色凋亡試劑盒進(jìn)行PBS清洗時(shí),每次清洗5min。PBS清洗后,為了各種反應(yīng)的有效進(jìn)行,請盡量除去PBS溶液后再進(jìn)行下一步反應(yīng)。在載玻片上的樣本上加上實(shí)驗(yàn)用反應(yīng)液后,請蓋上蓋玻片或保鮮膜,或在濕盒中進(jìn)行,這樣可以使反應(yīng)液均勻分布于樣本整體,又可以防止反應(yīng)液干燥造成實(shí)驗(yàn)失敗。
  甲基綠(MethylGreen)染液(3-5%甲基綠溶于0.1M醋酸巴比妥PH4.0)染色后,請用滅菌蒸餾水清洗多余的甲基綠。然后進(jìn)行洗凈(100%乙醇)、脫水(二甲苯)透明、封片后通過光學(xué)顯微鏡觀察操作。如果此時(shí)使用80~90%的乙醇洗凈時(shí),甲基綠比較容易脫色,注意快速進(jìn)行脫水操作。熒光素標(biāo)記的dUTP液含甲次鹽和二氯鈷等致癌物,可通過吸入、口服等途徑進(jìn)入機(jī)體,注意防護(hù)。
  染色凋亡試劑盒實(shí)驗(yàn)方法和原理:
  細(xì)胞凋亡早期改變發(fā)生在細(xì)胞膜表面,目前早期識別仍有困難。這些細(xì)胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細(xì)胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外,使PS暴露在細(xì)胞膜外表面。PS是一種帶負(fù)電荷的磷脂,正常主要存在于細(xì)胞膜的內(nèi)面,在細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細(xì)胞膜外。
  AnnexinV是一種Ca+依賴的磷脂結(jié)合蛋白,發(fā)現(xiàn)是一種具有很強(qiáng)的抗凝血特性的血管蛋白,AnnexinV具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性。對PS有高度的親和性。因此,該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細(xì)胞膜表面的PS。
  PS轉(zhuǎn)移到細(xì)胞膜外不是凋亡所*的,也可發(fā)生在細(xì)胞壞死中。兩種細(xì)胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細(xì)胞膜是完好的,而細(xì)胞壞死在其早期階段細(xì)胞膜的完整性就破壞了。因此,可以建立一種用AnnexinV結(jié)合在細(xì)胞膜表面作為凋亡的指示并結(jié)合一種染料排除試驗(yàn)以檢測細(xì)胞膜的完整性的檢測方法。

 

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